详细步骤和注意事项(考科二步骤流程注意事项)
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移液管润洗的详细步骤和注意事项
移液管润洗步骤：
1、先用自来水淋洗后，用铬酸洗涤液浸泡，操作方法如下：
（1）用右手拿移液管上端合适位置，食指靠近管上口，中指和无名指张开握住移液管外侧，拇指在中指和无名指中间位置握在移液管内侧，小指自然放松；
（2）左手拿洗耳球，尖口向下，排出球内空气，将吸耳球尖口插入或紧接在移液管上口，注意不能漏气。慢慢松开左手手指，将洗涤液慢慢吸入管内，直至刻度线以上部分，移开吸耳球，迅速用右手食指堵住移液管上口，等待片刻后，将洗涤液放回原瓶；
（3）用自来水冲洗移液管内、外壁至不挂水珠，再用蒸馏水洗涤3次，控干水备用。
2、待取溶液润洗：
（1）摇匀待吸溶液，将待吸溶液倒于一洗净干燥的小烧杯中，将清洗过的移液管尖端内外的水分吸干；
（2）插入小烧杯中吸取溶液，当吸至移液管容量的1/3时，立即用食指按住管口，取出，横持并转动移液管，使溶液流遍全管内壁，后将溶液从下端尖口处排入废液杯内；
（3）如此操作，润洗了3－4次后即可吸取溶液。
注意事项：
1、移液管不可在烘箱中烘干。
2、移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作两者的相对体积校准。
3、在使用吸量管时，为了减少测量误差，每次都应从最上面刻度（0刻度）处为起始点，往下放出所需体积的溶液，而不是需要多少体积就吸取多少体积。
4、需注意移液管管身是否标有“吹”字样，若有，则需要用洗耳球吹出管口残余液体。若没有，千万不要吹出管口残余，否则引起量取液体过多。
5、移液管不能移取太热或太冷的溶液。
扩展资料：
移液管调节液面操作方法：
1、取一干净小烧杯，将移液管管尖紧靠小烧杯内壁，小烧杯保持倾斜，使移液管保持垂直，刻度线和视线保持水平。
2、稍稍松开食指，使管内溶液慢慢从下口流出，液面将至刻度线时，按紧食指，停顿片刻，再按上法将溶液的凹液面最低端放至与标线上缘相切为止，立即用食指压紧管口。
3、将尖口处紧靠烧杯内壁，向烧杯口移动少许，去掉尖口处的液滴。将移液管小心移至承接溶液的容器中。
参考资料来源：百度百科-移液管
DNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些
一、DNA提取的完整步骤：
1．取新鲜或冷冻样品的肌肉组织100ul-200ul或95%ALC保存的样品组织0.05g。 2．将组织尽量剪碎，分别装入1.5ml的离心管中。
3．每管中加入450ul的裂解缓冲液(10mM Tris-HCl pH8.0; 100mM EDTA, pH8.0)
4．每管加入10% SDS 50-100ul(70-80不定)(1-2%),再加入2.5-5ul（3ul）蛋白酶K(20mg/ml)，使其终浓度达100ug/ml.混匀，55℃ 3h至过夜（期间将管子颠倒几次）。
5．样品中加入150ul NaCl（盐析作用），室温8000rpm离心20min，去沉淀，然后在上清液
中加入等体积（500ul）预冷异丙醇（沉淀DNA），混匀，20℃处理30min，14000rpm离心10min，去上清液。沉淀加70%ALC洗涤离心去ALC，室温挥发ALC5-10min，加TE 500ul，加10ul RNAase(终浓度4mg/ul)，即2.5ul。37℃ 30min或65℃ 15min。
6．加等体积酸液（提取DNA中的蛋白质）缓慢来回颠倒离心管10min，13000-15000rpm离心10min。用移液管（大口Tip头）小心取出上层相至另外干净的离心管中，不要触到两相之间的白色蛋白层（可视情况重复操作次）。
7．加入等体积酚：氯仿(催取酚)（1：1），轻摇,缓慢颠倒混匀10min 13000-15000rpm离心5-10分钟，取上层清液于干净离心管中。
8．加入等体积氯仿（氯仿：异戊醇（阻止氯仿挥发）=24：1），轻摇，缓慢颠倒混匀
10min,13000-15000rpm离心5-10min。取上清液加入1/10体积2M NaCl和等体积-20℃保存的无水乙醇（或等体积异丙醇）（沉淀DNA），沉淀DNA 10min,13000rpm离心5min，去上清，加入100-150ul70%ALC,离心，小心倒掉ALC（当心DNA沉淀丢失），用70%ALC再洗一次，然后去ALC。45℃烘箱烘干15-30min，用双蒸水沿管壁沿四周冲洗（TE量视DNA沉淀量而定，在80-250ul之间），溶解12-24h,-20℃保存备用。
二、注意事项：
1、裂解液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解。
2、酚一定要碱平衡。苯酚具有高度腐蚀性，飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会造成损伤，因此应注意防护。氯仿易燃、易爆、易挥发，具有神经毒作用，操作时应注意防护。
3、各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解。
4、取各上清时,不应贪多,以防非核酸类成分干扰。
5、异丙醇,乙醇.NaAc,KAc等要预冷,以减少DNA的降解,促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀。
6、提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。
7、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
一、细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。
加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。
二、细胞传代
细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。
加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
三、细胞冻存
细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。
加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。
冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
注意事项
（1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：
①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。
②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。
③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。
④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。
⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。
⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。
⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。
（2）细胞污染的预防
①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。
②操作过程防止污染。
③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。
④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。
⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。
⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。
⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。
⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。
⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。
⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。
（3）防止细胞交叉污染
①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。
②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。
③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。
扩展资料：
细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。
不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。
细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
参考资料：百度百科：细胞培养
高中化学中和热测定实验具体步骤及注意事项
一、具体步骤。
①用量筒量取50 mL 0.25 mol·L-1硫酸倒入小烧杯中，测出硫酸温度。
②用另一量筒量取50 mL 0.55 mol·L-1NaOH溶液，并用另一温度计测出其温度。
③将NaOH溶液倒入小烧杯中，设法使之混合均匀，测出混合液最高温度。
二、注意事项。
1.碎泡沫塑料及泡沫塑料板的作用是隔热，目的是减少热量的散失。
2.为保证酸完全中和，常使碱稍稍过量。当然，酸也可以过量，但要保证后加的过量。
3.实验中若使用弱酸或弱碱，会使测得数值偏低。
4.使用环形玻璃搅拌棒，而不使用金属棒，是因为玻璃导热性差，减少热量损失。
5.操作都要快，手速快，目的还是为了减少热量损失，以防增大误差。
6.温度计最好准备三把，一把测酸，一把测碱，一把测混合液。
扩展资料：化学中和热测定的问题：
1、硫酸与氢氧化钡反应，生成1molH2O时，放出的热比中和热更多，原因：除了发生中和反应外，还发生了下列反应： Ba2+(aq)+SO42-(aq)=BaSO4(s)，此反应为熵减反应，放热（学过化学反应原理就能理解了）。
2.中和热指25℃，101 k pa时，强酸与强碱的稀溶液发生中和反应生成1molH2O放出的热，单位kl/mol，此处的物质的量当然是指H2O的物质的量。
根据1，显然此处的强酸、强碱，并不适用硫酸和氢氧化钡。实际上指适用于离子方程式为：
H++OH-=H2O的反应
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